植物油黄曲霉毒素B1的检测方法及设备需严格遵循国际和国内标准,核心流程包括样品前处理、净化、衍生化及仪器分析。具体方法与设备如下:
一、主流检测方法
免疫亲和柱净化-高效液相色谱法(HPLC-FLD)
流程:
提取:取5.0g植物油,加20mL 84%乙腈水溶液,涡旋振荡1分钟,超声萃取20分钟,离心取上清液;
净化:上清液稀释后过免疫亲和柱(如Copure®黄曲霉毒素B1柱),依次用水淋洗、甲醇洗脱;
衍生化:洗脱液氮吹近干,加三氟乙酸和正己烷避光衍生(40℃水浴15分钟);
分析:衍生后样品用15%乙腈水溶液溶解,经0.22μm滤膜过滤,上机检测。
适用标准:
中国国标 GB 5009.22-20166;
出口标准 SN/T 3868-2014(适用花生油、橄榄油等出口检测)。
胶体金快速检测卡法
流程:
粉碎样品,加提取剂震荡离心;
取上清液与稀释液混合,滴入检测卡加样孔;
孵育后插入检测仪定量分析(如黄曲霉毒素B1检测仪)。
特点:
10分钟内出结果,阳性样本需复检;
检出限可达1μg/kg,适合现场初筛。
检测流程示意图:免疫亲和柱净化步骤、衍生化反应装置、胶体金检测卡结果判读示例
二、核心检测设备
设备类型 功能说明 代表型号/操作要点
全自动前处理系统 自动完成称样、萃取、离心等步骤 支持20g样品精准称量,离心参数5000rpm/10min
高效液相色谱仪 分离并定量黄曲霉毒素B1,搭配荧光检测器(FLD) Waters Alliance 2695,C18色谱柱,激发波长360nm
黄曲霉毒素检测仪 快速读卡分析,集成孵育模块 支持37℃恒温孵育,μL自动加样
氮吹仪 浓缩洗脱液,控制衍生化温度 50℃氮吹至近干,避免目标物分解
相关设备图解:免疫亲和柱结构、HPLC荧光检测器工作原理、便携式检测仪操作界面
三、关键注意事项
衍生化安全性:三氟乙酸具强腐蚀性,需在通风橱内操作,避光防分解;
假阳性控制:快速法需严格按孵育时间(如37℃±0.5℃),温度偏差易导致误判;
交叉污染预防:免疫亲和柱一次性使用,HPLC进样前需更换滤膜。
操作演示:植物油离心萃取步骤、胶体金卡加样技巧、HPLC仪器校准流程
四、方法选择建议
实验室精准定量:优先选免疫亲和柱-HPLC法,符合 GB 5009.22 及 SN/T ;
现场快速筛查:胶体金检测卡法(需验证检出限是否符合监管要求)。
注:出口植物油需额外满足 SN/T 3868 的净化要求(如水淋洗体积控制)。