磷脂脂肪酸（PLFA）分析微生物群落
样品提取：取冻干土壤或粪便样品2g，加入氯仿-甲醇-磷酸盐缓冲液（2:1:0.8），振荡避光处理40分钟，离心取氯仿相。
磷脂分离：通过硅胶柱色谱分离磷脂，依次用氯仿、丙酮洗脱杂质，再用无水甲醇洗脱磷脂组分，氮吹浓缩。
甲基化：加入甲醇-甲苯混合液和0.2M KOH，85°C水浴15分钟，冷却后加冰乙酸中和；加正己烷萃取脂肪酸甲酯，氮吹至干。
检测与鉴定：使用GC-MS或全自动系统（如Sherlock®），匹配数据库（含2000+微生物PLFA特征，如革兰氏阳性菌的i15:0）；同位素示踪（13C-PLFA）需结合GC-C-IRMS，δ13C分辨率达0.3‰。
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