色谱柱选择原则
脂肪酸分析(尤其是甲酯化后的FAME)需根据目标物极性、沸点差异及分离需求选择色谱柱:
非极性/弱极性柱(如DB-1、HP-5):适用于沸点差异明显但极性相近的脂肪酸,如C16-C18饱和与单不饱和脂肪酸的分离
中等极性柱(如DB-23):可分离复杂混合物及部分顺反异构体,适用于多不饱和脂肪酸(如鱼油中的EPA/DHA)
强极性柱(如HP-88):专用于顺反异构体分离,如共轭亚油酸或共轭亚麻酸
关键参数优化
柱长:30米为常规选择,复杂样品(如VOC或脂质组学)可选用60-150米长柱,但分析时间延长
内径:0.25mm(高分离度)或0.32mm(平衡速度与分辨率),0.53mm适用于大口径进样或痕量分析
膜厚:0.25μm(快速分析)或0.5μm(高载样量),长链脂肪酸需更厚固定相以减少峰拖尾
特殊场景建议
短链脂肪酸(SCFA):推荐使用熔融石英毛细管柱(如FFAP),结合GC-MS提升灵敏度
离子液体柱:适用于脂质组学中极性脂肪酸的分离,如丁酸与丙酸的基线分离
注意事项
耐温性:硅胶柱需避免pH>8的流动相,否则固定相易水解;聚合物柱(如PLOT)适合高温或腐蚀性条件
国产替代:在成本敏感领域(如环境监测),国产色谱柱(如纳微科技产品)性价比优势显著,但需验证柱效与重现性
实验验证
建议通过标准品(如37种FAME混合物)测试分离效果,比较不同柱型的峰形、保留时间及拖尾因子